세포배양 (cellculture)
1. 배양이란? 생체 조직을 생체 밖의 환경에서 어느 일정 기간 생육시키는 기술이다. 생명현상 해명을 위하여 세포, 조직을 독립된 생명체로 인식하고 분자 생물학 등 연구재료로 이용하기 위해 만들었다. 사용구조에 따라 기관배양(organ culture), 조직배양(tissue culture), 세포배양(cell culture)으로 나눌수있고 세포종류에 따라 초대배양(primary culture), 세포주 배양(cell line culture)로 나눌수있다.
2. 배양의 분류
초대배양 & 세포주 배양
초대배양
정상조직이나 암조직으로 부터 바로 분리된 세포의 배양으로서 여러 세포종이 혼합된다. 원래의 세포기능을 유지한다는것이 장점이고 세포의 균일성, 재현성을 확신할 수 없다는것이 단점이다.
세포주 배양
무한 증식을 할 수 있는 세포로 현재는 단일 세포라는 개념이다.
3. 배양시설
| 배양설비 | 사용용도 |
| 탄산가스 배양기(CO2 incubator) | pH조적은 배지의 중탄산 나트륨과 CO2가스의 평형에 의해 이루어진다.5% CO2 - 95% air 유지- 가습 vat : 습도 조절 |
| 배양실과 clean bench | 배양실 : 무균실 clean bench : 무균조작을 위한 무균상자, 자외선 멸균장치 포함 |
| 배양 접시 | culture flask - 배양용량이 큰 배양용기, screw cap부착petri-dish - 조직배양용 dish(접착세포 배양), 일반세균 배양용dish(부유세포 배양)multi-well plate - 96 well 사용, 소량의 배양액 |
| 에어컨 | 온도조절 |
| Inverted microscope | 무염색 세포관찰 |
| 가압 증기 멸균기(autoclave) | 멸균장치 |
| Deep freezer | 동결보존 -80도 유지 |
| 원심분리기 | 세포와 배양액의 분리 |
| 냉동냉장고 | 배지, 시약 등의 보존 |
| cover slip | 염색용 |
| auto pipette | 분주 |
| 혈구 게시판 | 세포수 측정 |
4.세포수 계산법
1) 전세포수 계산
culter counter
혈구 계산판
2) 생세포수 계산
원리 : 색소 배제 능력 tryphan blue염색 - 사세포는 배제 능력이 없고 청색으로 염색한다.
생세포율(%) = (생세포수) / (생세포수 + 사세포수)
생세포수(cell / ml) = 전세포수(cells / ml) X 생존율(%)