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<strong><br />
<font size="3"><br />SDS - PAGE</font><br /></strong><br /><strong><font style="BACKGROUND-COLOR: #ccffcc"><br />
준비물<br />
</font></strong><br />
- 5ml syringe와 19~24G의 주사침 (gel판 하단의 공기를 제거할 때 사용)<br />
<br />
<strong><br />2) 시약류</strong><br /><br />
- 30% Acrylamide mixture<br />
- 0.75M Tris-HCl (pH 8.8)<br />
- 2*sample buffer<br />
- 영동 buffer<br />
<br />
<br />
<strong>3) 시약의 조제<br />
</strong><br />
<font color="#000000"><font style="BACKGROUND-COLOR: #ffff99"><strong>30% acrylamide mixture</strong><br />
</font></font><br /> Acrylamide - 73g (최종농도 ; 29.2%)<br />
N-N'- Methylenebisacrylamide - 2g (0.8%)<br />
<br />
-> DW를 가하여 total 250ml이 되게 한다. 차광하여 냉장보존. 미중합의 acrylamide는 신경독이 있는 것으로 알려져 있으며, 손으로 직접 만지지 말 것 <br />
<br />
* 가호제는 N-N'-Methylenebisacrylamide 가 가장 일반적이지만 다른 것도 있음. 예를 들면 Piperazine diacrtlamide (Bio-Rad사) 는 gel의 강도가 높은 것이 있기 때문에 최근에 간혹 사용됨<br />
<br />
<strong><font style="BACKGROUND-COLOR: #ffff99"><br />0.75M Tris-HCl (pH 8.8)</font></strong><br /><br />
Tris base - 90.75g<br />
<br />
-> DW를 첨가하여 약 800ml이 되게 하고, 실온에서 6N HCl로서 pH를 8.8 에 맞춘 후 1L 이 되게 mess up 한다. 냉장보존<br />
<br />
<strong><font style="BACKGROUND-COLOR: #ffff99"><br />0.25M Tris-HCl (pH 6.8)</font></strong><br /><br />
Tris base - 30.25g<br />
<br />
-> DW를 첨가하여 약 800ml이 되게 하고, 실온에서 6N HCl로서 pH를 6.8 에 맞춘 후 1L 이 되게 mess up 한다. 냉장보존<br />
<br />
** Tris buffer는 온도에 의해서 pH가 변한다. SDS - PAGE는 실온에서 행하기 때문에 pH의 조정은 실온에서 행할 것. pH를 맞출 대 중화열에서 액온이 상승하면, 일단 pH를 맞춘 후 실온에서 방치하고 한 번 더 정확하게 pH를 맞춘 후 mess-up한다.<br />
<br />
<strong><font style="BACKGROUND-COLOR: #ffff99"><br />10% SDS</font></strong><br /><br />
SDS - 10g (10%)<br />
<br />
-> DW를 첨가하여 total 100ml 이 되게 한다. 실온 보존.<br />
<br />
<strong><font style="BACKGROUND-COLOR: #ffff99"><br />25% APS</font></strong><br /><br />
Ammonium Persulfate - 250mg (25%)<br />
DW - 1ml <br />
-> 차광하여 냉장 보존에서 3~4 주간 사용 가능<br />
<br />
<strong><font style="BACKGROUND-COLOR: #ffff99"><br />2X sample buffer</font></strong><br /><br />
0.25M Tris-HCl (pH 6.8) - 25ml (0.125M)<br />
2-Mercaptoethanol - 5ml (10%)<br />
Bromophenol blue - 2ug (0.004%)<br />
<br />
-> DW를 가하여 total 50ml 이 되게 한다. 냉장 보존.<br />(장기간 보존할 경우는 2-Mercaptoethanol을 넣어서 보존하는 것이 바람직하다.<br /><br /><strong><font style="BACKGROUND-COLOR: #ffff99"><br />10X 영동 buffer</font></strong><br />
<br />
Tris base - 30.3g (250mM)<br />
Glycine - 144g (1.92M)<br />
-> DW를 가하여 total 1L이 되게 한다. 실온 보존.<br />
<br />
<strong><font style="BACKGROUND-COLOR: #ffff99"><br />영동 buffer</font></strong><br /><br />
10X Running buffer - 100ml<br />
DW - 900ml<br />
