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Western Blotting

402 bytes added, 20:30, 7 November 2006
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</tr>
<tr>
<tdcolspan="2">&nbsp;<strong>밴드가 많이 나타날 때</strong></td> <td>&nbsp;</td>
</tr>
<tr>
<tdbgcolor="#ffffff">&nbsp;항체의 희석율과 특이성에 </td> <tdbgcolor="#ffffff">&nbsp;일차 항체의 농도 검정을 다시 측정 (일차 항체 없이 control도)</td>
</tr>
<tr>
<tdbgcolor="#ffffff">&nbsp;</td> <tdbgcolor="#ffffff">&nbsp;이차 항체의 농도를 검정한다</td>
</tr>
<tr>
<tdbgcolor="#ffffff">&nbsp;</td> <tdbgcolor="#ffffff">&nbsp;일차 항체를 affinity 정제한다</td>
</tr>
<tr>
<tdbgcolor="#ffffff">&nbsp;영동한 단백질량이 너무 많으면</td> <tdbgcolor="#ffffff">&nbsp;영동한 단백질량을 측정한다</td>
</tr>
<tr>
<tdbgcolor="#ffffff">&nbsp;block이 불충분한게 된다</td> <tdbgcolor="#ffffff">&nbsp;blocking을 1시간 이상 overnight 한다</td>
</tr>
<tr>
<tdcolspan="2">&nbsp;<strong>밴드가 전혀 나타나지 않음</strong></td> <td>&nbsp;</td>
</tr>
<tr>
<tdbgcolor="#ffffff">&nbsp;항체역가가 약하거나 희석률이 부적당</td> <tdbgcolor="#ffffff">&nbsp;반드시 알고 있는 일차 항체를 positive control로 하고, 일차 항체, 이차 항체의<br />
&nbsp;농도 검정을 다시 할 것&nbsp;</td>
</tr>
<tr>
<tdbgcolor="#ffffff">&nbsp;block이 약할 경우</td> <tdbgcolor="#ffffff">&nbsp;blocking을 1시간 정도로 늘리고, 일차 항체를 overnight로 반응시킴&nbsp;</td>
</tr>
<tr>
<tdbgcolor="#ffffff">&nbsp;항원이 적을 경우</td> <tdbgcolor="#ffffff">&nbsp;영동한&nbsp;단백질을 증가시킨다&nbsp;</td>
</tr>
<tr>
<tdbgcolor="#ffffff">&nbsp;검출법이 적당하게&nbsp;없을 때&nbsp;</td> <tdbgcolor="#ffffff">&nbsp;DAB법으로 검출되지 않을 경우는 화학 발광법으로 검출한다&nbsp;&nbsp;</td>
</tr>
<tr>
<tdbgcolor="#ffffff">&nbsp;적당한 buffer가 없을 때</td> <tdbgcolor="#ffffff">&nbsp;Tween-PBS를 Tween-PBS (Tris buffer)&nbsp;등으로 교환한다&nbsp;</td>
</tr>
<tr>
<tdcolspan="2">&nbsp;<strong>Membrane 전체가 검을 경우</strong></td> <td>&nbsp;</td>
</tr>
<tr>
<tdbgcolor="#ffffff">&nbsp;blocking이 불충분</td> <tdbgcolor="#ffffff">&nbsp;반드시 Tween을 넣은 blocking액을 사용하고, overnight로 block한다 </td>
</tr>
<tr>
<tdbgcolor="#ffffff">&nbsp;항체가 변성하여 있는 경우</td> <tdbgcolor="#ffffff">&nbsp;표식한 proteinA로 검출한다</td>
</tr>
</tbody>

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