세포배양 (cellculture)&nbsp;<br /><br />1. 배양이란? 생체 조직을 생체 밖의 환경에서 어느 일정 기간 생육시키는 기술이다. 생명현상 해명을 위하여 세포, 조직을 독립된 생명체로 인식하고 분자 생물학 등 연구재료로 이용하기 위해 만들었다.&nbsp; 사용구조에 따라 [[기관배양]](organ culture), [[조직배양]](tissue culture), [[세포배양]](cell culture)으로 나눌수있고 세포종류에 따라 [[초대배양]](primary culture), [[세포주 배양]](cell line culture)로 나눌수있다.&nbsp;<br /><br />2. 배양의 분류<br />초대배양 &amp; 세포주 배양<br /><br />초대배양<br />정상조직이나 암조직으로 부터 바로 분리된 세포의 배양으로서 여러 세포종이 혼합된다. 원래의 세포기능을 유지한다는것이 장점이고 세포의 균일성, 재현성을 확신할 수 없다는것이 단점이다.<br /><br />세포주 배양<br />무한 증식을 할 수 있는 세포로 현재는 단일 세포라는 개념이다.&nbsp;<br /><br />3. 배양시설<br /p><table style="WIDTH: 843px; HEIGHT: 294px" cellspacing="1" cellpadding="1" width="843" summary="1184" border="1">

<tdwidth="1174" colspan="3" height="35">배양설비 <ul> <p>세포배양 (cellculture)&nbsp;</tdp> <td/ul>사용용도 </td>

<td>탄산가스 [[배양기]](CO₂ incubator)</tdwidth="132" height="87"> <td>pH조적은 배지의 중탄산 나트륨과 CO<sub>2</subp>가스의 평형에 의해 이루어진다.<br /> 5% CO₂ - 95% air 유지<br /> 재킷형 CO₂incubator 주로 사용 - water 재킷(멸균수) : 온도 조절<br /> &nbsp;&nbsp;배 &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;양</p> </td> <td width="1036" colspan="2" height="87">&nbsp;&nbsp;생체 조직을 생체 밖의 환경에서 어느 일정 기간 생육시키는 기술이다. 생명현상 해명을 위하여 세포, 조직을 독립된 생명체로 인식하고 분자 생물학 등 연구재료로 이용하기 위해 만들었다.&nbsp;사용구조에 따라 [[기관배양]](organ culture), [[조직배양]](tissue culture), [[세포배양]](cell culture)으로 나눌수있고 세포종류에 따라 [[초대배양]](primary culture), [[세포주 배양]](cell line culture)로 나눌수있다.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; - 가습 vat : 습도 조절<br /> </td>

<tdwidth="132" height="94" rowspan="2"> <p>배양실과 [[clean&nbsp;bench]]&nbsp;배양의 분류</p> </td> <tdwidth="130" height="53"> <p>배양실&nbsp;:&nbsp; 무균실초대배양</p> <br /td> clean bench : 무균조작을 위한 무균상자<td width="900" height="53"> <p>정상조직이나 암조직으로 부터 바로 분리된 세포의 배양으로서 여러 세포종이 혼합된다. 원래의 세포기능을 유지한다는것이 장점이고 세포의 균일성,&nbsp;자외선 멸균장치 포함재현성을 확신할 수 없다는것이 단점이다.</p> </td>

<tdwidth="130" height="39">[[ <p>세포주 배양 접시]]</tdp> </td>culture flask - 배양용량이 큰 배양용기, screw cap부착 <br /td width="900" height="39"> petri-dish - 조직배양용 dish(접착세포 배양), 일반세균 배양용dish(부유세포 배양)<br p>무한 증식을 할 수 있는 세포로 현재는 단일 세포라는 개념이다.</p> multi-well plate - 96 well 사용, 소량의 배양액</td>

<tdwidth="132" height="45"> <p>&nbsp;&nbsp;배&nbsp;&nbsp;양 &nbsp;시&nbsp; 설</p> </td> <td width="1036" colspan="2" height="45"> <table style="WIDTH: 1034px; HEIGHT: 516px" cellspacing="1" cellpadding="1" width="1034" summary="" border="1"> <tbody> <tr> <td width="241" height="27">배양설비</td> <td width="783" height="27">사용용도</td> </tr> <tr> <td width="241" height="102">탄산가스 [[배양기]](CO₂ incubator)</td> <td width="783" height="102">pH조적은 배지의 중탄산 나트륨과 CO₂가스의 평형에 의해 이루어진다.<br /> 5% CO₂ - 95% air 유지<br /> 재킷형 CO₂incubator 주로 사용 - water 재킷(멸균수) : 온도 조절<br /> &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; - 가습 vat : 습도 조절</td> </tr> <tr> <td width="241" height="51">배양실과 [[clean&nbsp;bench]]</td> <td width="783" height="51">배양실&nbsp;:&nbsp; 무균실<br /> clean bench : 무균조작을 위한 무균상자,&nbsp;자외선 멸균장치 포함</td> </tr> <tr> <td width="241" height="71">[[배양 접시]]</td> <td width="783" height="71">culture flask - 배양용량이 큰 배양용기, screw cap부착<br /> petri-dish - 조직배양용 dish(접착세포 배양), 일반세균 배양용dish(부유세포 배양)<br /> multi-well plate - 96 well 사용, 소량의 배양액</td> </tr> <tr> <td width="241" height="27">에어컨</td> <tdwidth="783" height="27">온도조절</td> </tr> <tr> <td width="241" height="31">[[Inverted microscope]]</td> <td width="783" height="31">무염색 세포관찰</td> </tr> <tr> <td width="241" height="28">[[가압 증기 멸균기]](autoclave)</td> <td width="783" height="28">멸균장치</td> </tr> <tr> <td width="241" height="27">[[Deep freezer]]</td> <td width="783" height="27">동결보존 -80도 유지</td> </tr> <tr> <td width="241" height="27">[[원심분리기]]</td> <td width="783" height="27">세포와 배양액의 분리</td> </tr> <tr> <td width="241" height="28">냉동냉장고</td> <td width="783" height="28">배지, 시약 등의 보존</td> </tr> <tr> <td width="241" height="27">[[cover slip]]</td> <td width="783" height="27">염색용</td> </tr> <tr> <td width="241" height="27">[[auto pipette]]</td> <td width="783" height="27">분주</td> </tr> <tr> <td width="241" height="27">혈구 게시판</td> <td width="783" height="27">세포수 측정</td> </tr> </tbody> </table> </td>

<tdwidth="132" height="129" rowspan="2">[[Inverted microscope]] <p>&nbsp;&nbsp;세포수 계산법</p> </td> <tdwidth="130" height="51">무염색 세포관찰&nbsp;&nbsp;전세포수 계산<br /> </td> <td width="900" height="51">&nbsp;&nbsp;culter counter<br /> &nbsp;혈구 계산판<br /> </td>

<td>[[가압 증기 멸균기]](autoclave)</tdwidth="130" height="76"> <td>멸균장치</tdp> 생세포수 계산</tr> <trp> <td>[[Deep freezer]]</td> <tdwidth="900" height="76">동결보존 원리 : 색소 배제 능력&nbsp;&nbsp; tryphan blue염색 -80도 유지사세포는 배제 능력이 없고 청색으로 염색한다.<br /td> </tr> <tr> <td>[[원심분리기]]<&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;생세포율(%)&nbsp; = (생세포수) /td> <td>세포와 배양액의 분리</td> (생세포수 + 사세포수)<br /tr> <tr> <td>냉동냉장고<&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;생세포수(cell /td> <td>배지, 시약 등의 보존<ml) = 전세포수(cells /td> </tr> <tr> <td>[[cover slip]]</td> <td>염색용</td> </tr> <tr> <td>[[auto pipette]]</td> <td>분주</td> </tr> <tr> <td>혈구 게시판</td> <td>세포수 측정ml) X 생존율(%) </td>

<br /p>4.세포수 계산법<br />&nbsp;&nbsp; 1) 전세포수 계산<br />&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; culter counter<br />&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 혈구 계산판<br />&nbsp;&nbsp; 2) 생세포수 계산<br />&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 원리 : 색소 배제 능력&nbsp;&nbsp; tryphan blue염색 - 사세포는 배제 능력이 없고 청색으로 염색한다.<br />&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;생세포율(%)&nbsp; = (생세포수) / (생세포수 + 사세포수)<br />&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;생세포수(cell / ml) = 전세포수(cells / ml) X 생존율(%)