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<strong><font style="BACKGROUND-COLOR: #ffffff" size="2">Immunohistichemistry (면역염색)<br />
<br />
</font></strong><font style="BACKGROUND-COLOR: #ffffff" size="2"> - 특이적인 항체(antibody, 이하 Ab)로 세포, 조직 내의 target 항원(antigen, 이하 Ag)의 위치와 분포 동정이 목적<br />
- Ab는 형광물질(fluorescent), colorimetric label이 붙어 있어, label 위치로 taget Ag의 위치를 파악할 수 있는 것임.<br />
<br />
</font><font size="2"><font style="BACKGROUND-COLOR: #ffffff"><strong>Protocol 1<br />
<br />
1. 목적 :</strong> cytokine을 monoclonal Ab (단일클론항체)를 이용하여 indirect staning!!<br />
ex) IL-1, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, IFN-r, TNF-α<br />
<br />
<strong>2. 재료 및 장비<br />
</strong> - Frozen sections (동결절편) of sample tissues<br />
- Glass slides<br />
- Cover slips<br />
- 4% paraformaldehyde, pH 7.4<br />
- Tris-buffered Saline, 0.1% Saponin, pH 7.4<br />
- Tris-buffered Saline/ 0.3% H2O2/ 0.1% Saponin, 0.02% NaN3<br />
- 1% Goat Serum in TBS/ Saponin<br />
- Refrigerator (4도)<br />
- Primary Ab<br />
- Secondary Ab<br />
- Diaminobenzidine tetrachloride <br />
- Hematoxylin<br />
- Ethanol<br />
- Microscope<br />
<br />
<strong>3. Procedure<br />
</strong>1) 실온에서 2시간 동안 동결조직 절편 (8um thickness)을 말린다.<br />
2) 실온에서 절편을 4% paraformaldehyde로 15분간 고정시킨다. (Fixation)<br />
3) TBS/ 0.1% Saponin으로 slide를 각각 5분씩 washing (2번 * 5분)<br />
4) TBS/ H2O2/ Saponin/ NaN3에 30분간 incubation, endogenous peroxidase block<br />
5) TBS/ Saponin으로 slide washing (3번 * 3분)<br />
6) TBS/ Saponin으로 1/100으로 희석시킨 goat serum을 20분간 처리하여, non-specific한 binding site를 block<br />
7) Ab로 4도씽[서 overnight incubation<br />
8) <br />
</font></font>
<br />
</font></strong><font style="BACKGROUND-COLOR: #ffffff" size="2"> - 특이적인 항체(antibody, 이하 Ab)로 세포, 조직 내의 target 항원(antigen, 이하 Ag)의 위치와 분포 동정이 목적<br />
- Ab는 형광물질(fluorescent), colorimetric label이 붙어 있어, label 위치로 taget Ag의 위치를 파악할 수 있는 것임.<br />
<br />
</font><font size="2"><font style="BACKGROUND-COLOR: #ffffff"><strong>Protocol 1<br />
<br />
1. 목적 :</strong> cytokine을 monoclonal Ab (단일클론항체)를 이용하여 indirect staning!!<br />
ex) IL-1, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, IFN-r, TNF-α<br />
<br />
<strong>2. 재료 및 장비<br />
</strong> - Frozen sections (동결절편) of sample tissues<br />
- Glass slides<br />
- Cover slips<br />
- 4% paraformaldehyde, pH 7.4<br />
- Tris-buffered Saline, 0.1% Saponin, pH 7.4<br />
- Tris-buffered Saline/ 0.3% H2O2/ 0.1% Saponin, 0.02% NaN3<br />
- 1% Goat Serum in TBS/ Saponin<br />
- Refrigerator (4도)<br />
- Primary Ab<br />
- Secondary Ab<br />
- Diaminobenzidine tetrachloride <br />
- Hematoxylin<br />
- Ethanol<br />
- Microscope<br />
<br />
<strong>3. Procedure<br />
</strong>1) 실온에서 2시간 동안 동결조직 절편 (8um thickness)을 말린다.<br />
2) 실온에서 절편을 4% paraformaldehyde로 15분간 고정시킨다. (Fixation)<br />
3) TBS/ 0.1% Saponin으로 slide를 각각 5분씩 washing (2번 * 5분)<br />
4) TBS/ H2O2/ Saponin/ NaN3에 30분간 incubation, endogenous peroxidase block<br />
5) TBS/ Saponin으로 slide washing (3번 * 3분)<br />
6) TBS/ Saponin으로 1/100으로 희석시킨 goat serum을 20분간 처리하여, non-specific한 binding site를 block<br />
7) Ab로 4도씽[서 overnight incubation<br />
8) <br />
</font></font>