제한효소 (restriction enzyme)
DNA도 특정부위를 자르고 붙일때 쓰인다. DNA를 자른다는 것은 nucleotide들이 연결되어 있는 phosphodiester 결합을 끊어내는 것이며 이런 역할을 하는 효소를 nuclease라고 하고 바깥쪽을 자르는가 안쪽을 자르는가에 따라서 각각 exonuclease, endonuclease라고 부른다.
Endonuclease의 대표적인 것이 바로 제한효소(restriction enzyme, restriction endonuclease)라 부르며 DNA에 존재하는 특정한 염기서열을 인식하고 인식한 서열부위 또는 그 근처에 존재하는 특정부위를 절단할 수 있다. 영어로 renzyme이라고도 불린다. 제한효소는 원래 세균이 자신의 세포 내로 침입해 들어오는 외부 DNA를 제거하기 위한 방어기전으로 가지고 있는 것이며, 자신의 DNA는 절단부위의 염기(adenine, cytosine)를 메틸화 시켜서 자신의 제한효소가 자신의 DNA를 자를 수 없게 보호하고 있다.
제한효소는 3가지로 나누는데 실험실에서 사용되는 것은 대부분 type II이다.
1) Type I restriction enzyme
DNA의 특정부위를 인식하긴 하지만 인식된 부위가 아닌 다른 부위를 절단하는데 인식부위는 특이성을 가지지만 그로부터 약 1,000 base pair가 떨어진 부위를 절단을 한다. 따라서 원하는 부위를 선택하여 자르기가 어렵다. 이 효소들은 박테리아의 기능에는 중요하지만 실험목적으로는 잘 사용되지 않는다.
2) Type II restriction enzyme
인식부위와 절단부위가 모두 특이성이 있는 제한효소이므로 아주 유용하게 이용되고 있다. 대부분의 type II 제한효소는 4개, 5개, 또는 6개의 염기서열을 인식하며 이에 따라 DNA 상에 인식부위가 나타나는 빈도가 달라지게 된다. 6개의 염기서열을 인식한다면 이론상 46 = 4096 base pair 마다 한번씩 출현하게 된다.
제한효소가 인식할 수 있는 부위는 palindrome, 즉 앞으로 읽으나 뒤로 읽으나 염기서열이 같은 모양을 하고 있다. 잘린 후의 DNA 모양은 5'-overhang cohesive end, 3'-overhang cohesive end(sticky end) 또는 blunt end가 만들어질 수 있으므로 실험목적에 따라서 잘 선택해서 사용해야 한다.
예1) Eco RI 효소의 절단 부위: 5'-overhang cohesive end을 형성시킨다.
5'--GAATTC--3' 5'--G AATTC--3'
3'--CTTAAG--5' 3'--CTTAA G--5'
예2) Sac I 효소의 절단 부위: 3'-overhang cohesive end을 형성 시킨다.
5'--GAGCTC--3' 5'--GAGCT C--3'
3'--CTCGAG--5' 3'--C TCGAG--5'
예3) Sma I 효소의 절단 부위: blunt end를 형성시킨다.
5'--CCCGGG--3' 5'--CCC GGG--3'
3'--GGGCCC--5' 3'--GGG CCC--5'
3) Type III restriction enzyme
인식한 DNA 부위에서 어느 정도 떨어진 부위를 절단하여 잘 사용되지 않고 있다.