ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay)
ELISA는 항체에 효소를 결합시켜 항원-항체 반응을 확인하는 방법으로, 그 방법이 간단하고 비용이 많이 들지 않으며 다량 분석이 가능하여 현재 가장 널리 쓰이고 있는 항원-항체 분석법의 하나가 되고 있다. 특히 이 방법은 방사능면역시험법 (RIA, Radio ImmunoAssay) 과 같이 매우 민감한 반응이면서도 RIA에서처럼 방사능을 사용하지 않는다는 잇점이 있어서 그 사용이 증가되고 있는 방법이다.
항체에 결합되는 효소 중에는 간단한 기질 용액을 넣어주면 색깔을 띄는 반응이 이용되는데, 대표적인 효소로는 염기성인산분해효소 (alkaline phosphatase) 나 양고추냉이 과산화효소 (horseradish peroxidase, HRP) 등이 많이 이용되고 있다. 이들 효소는 항체 분자의 Fc 지역에 공유결합되도록 화학 반응을 이용하여 결합시켜 사용한다.
1) Direct ELISA
direct method는 항원과 반응하는 항체에 바로 효소를 결합시켜 사용하는 방법을 말한다.
2) Indirect ELISA
항원과 결합하는 항체 (1차항체, primary antibody) 에는 효소가 없고, 그 항체와 결합하는 항체 (2차항체, secondary antibody) 에 효소가 결합되어 있는 분석방법. 일반적으로 isotype에 대한 항체에 효소가 결합된 형태 (enzyme conjugated anti-isotype antibody, 예를 들어 alkaline phosphatase conjugated anti-mouse IgG 등) 으로 판매되고 있으며, 자신이 이용하는 일차항체의 급 (isotype) 에 맞는 효소결합항체를 구입하여 사용하면 된다.
3) Sandwich ELISA
항원이 plate에 잘 결합하도록, 항원에 대한 항체를 먼저 플레이트에 결합시키고, 그 항체에 항원을 결합시킨 다음, 직접법이나 간접법으로 조사하는 방법이다. 항원의 양이 적을 때 또는 미지의 샘플에 들어 있는 항원을 조사할 때 사용한다.
(참고사항) 혈청학적 방법