Immunohistichemistry (면역염색)
- 특이적인 항체(antibody, 이하 Ab)로 세포, 조직 내의 target 항원(antigen, 이하 Ag)의 위치와 분포 동정이 목적
- Ab는 형광물질(fluorescent), colorimetric label이 붙어 있어, label 위치로 taget Ag의 위치를 파악할 수 있는 것임.
Protocol 1
1. 목적 : cytokine을 monoclonal Ab (단일클론항체)를 이용하여 indirect staning!!
ex) IL-1, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, IFN-r, TNF-α
2. 재료 및 장비
- Frozen sections (동결절편) of sample tissues
- Glass slides
- Cover slips
- 4% paraformaldehyde, pH 7.4
- Tris-buffered Saline, 0.1% Saponin, pH 7.4
- Tris-buffered Saline/ 0.3% H2O2/ 0.1% Saponin, 0.02% NaN3
- 1% Goat Serum in TBS/ Saponin
- Refrigerator (4도)
- Primary Ab
- Secondary Ab
- Diaminobenzidine tetrachloride
- Hematoxylin
- Ethanol
- Microscope
3. Procedure
1) 실온에서 2시간 동안 동결조직 절편 (8um thickness)을 말린다.
2) 실온에서 절편을 4% paraformaldehyde로 15분간 고정시킨다. (Fixation)
3) TBS/ 0.1% Saponin으로 slide를 각각 5분씩 washing (2번 * 5분)
4) TBS/ H2O2/ Saponin/ NaN3에 30분간 incubation, endogenous peroxidase block
5) TBS/ Saponin으로 slide washing (3번 * 3분)
6) TBS/ Saponin으로 1/100으로 희석시킨 goat serum을 20분간 처리하여, non-specific한 binding site를 block
7) Ab로 4도씽[서 overnight incubation
8)