Yslee at 08:25, 20 January 2006

2006-01-20T08:25:28Z

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한 가닥으로 된 핵산이 이와 상보적인 염기 서열의 또 다른 한 가닥의 핵산과 적당한 조건에서 만나게 되면 이중나선(DNA-DNA or DNA-RNA)을 형성하는 현상(hybridization)의 원리를 응용한 것으로 DNA-DNA hybridization의 현상을 이용하는 기법이 southern blot이다. 
1) DNA를 추출한다. 2) 추출된 DNA를 제한효소로 절단한다. 3) 아가로스 겔 전기영동을 실시하여 크기별로 DNA 조각을 분리한다. 4) 이중나선 상태로 있는 DNA를 alkali로 단일 가닥 상태로 만들어 준 뒤 nitrocellulose filter나 nylon membrane으로 옮긴다. 이 때, gel 상에서의 DNA 위치가 변하지 않고 membrane으로 옮겨지게 된다. 5) Gel상에서 filter로 DNA를 옮기는 방법으로 capillary transfer 방법을 가장 많이 사용한다. 이 방법은 흡수지에 의해 transfer buffer가 빨아 올려지면서 buffer와 함께 DNA가 이동하여 membrane으로 옮겨지게 된다. 6) 목적하는 유전자를 검출하기 위해서 표지된 probe를 첨가하면 filler상에서 probe 와 상보적인 염기배열을 가진 DNA단편과 hybrid가 형성된다.(Hybridization) 7) 표식된 probe와 hybrid를 형성한 DNA 단편은 autoradiography에 의해 검출된다. 
가령 어떤 사람이 B형 간염 바이러스에 감염되었는가를 알려면 바이러스의 DNA를 [[probe]]로 사용한다. probe는 나일론 막의 전면에 흩어져 표면에 고정된 여러 DNA 조각들과 부딪히게 될 것이다. 그러나 같은 염기순서가 아니면 이중나선을 이루지 못하기 때문에 probe DNA는 막 위의 간염 바이러스 DNA에 가서만 이중나선을 이루게 된다. 막에 고정되어 있는 DNA와 이중나선을 형성하지 못하므로 probe DNA는 고정되지 못하고 다음과정에서 모두 씻겨 나간다. 이제 이 막 위에 필름을 얹어두면 이중나선을 형성한 probe DNA의 방사선에 의해 절편의 위치에 상을 맞게 얻게 된다. 이것은 바이러스의 존재 뿐 만 아니라 genome의 어느 위치에 삽입되어 있고 혹은 얼마나 존재하는지도 알려주며 다른 sample과 비교하면 더욱 많은 정보를 얻을 수 있다.

Southern blot - Revision history

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