View source for Blunt end를 sticky end로 전환하는 방법

<p><strong><font size="3">1.linker<br /></font></strong>&nbsp;blunt end인 &nbsp;double strand DNA에 짧은 염기를 붙여주는 방법이다.<br />이 짧은 염기서열은 중앙에 제한효소 절단 부분을 가지고 있어서 blunt end에 이 염기를 붙여준 후 제한효소로 잘라내면 sticky end가 될 수 있다.<br /><br /><strong><font size="3">2. adaptor<br /></font></strong>linker를 사용 못하는 경우 ( 짧은 염기서열을 자르를 제한효소인식 부분이 형질전환에 필요한 gene안에도 존재하여 사용 할 수 없을 때 이용한다.<br />먼저 단일 나선DNA를 합성한후 alkaline phosphatase를 처리하여 5프라임의 인산기를 제거한다. 그다음에 아래에 짧은 DNA를 붙여준다.&nbsp;<br />&nbsp;a.&nbsp;5-GCCTCTCT-3 (먼저 임의로 긴 염기서열을 만들어 준후<br />&nbsp;b,&nbsp;5프라임에 있는 인산기를 제거한다.<br />&nbsp;c.&nbsp;5-GCCTCTCT-3를 주형으로 하는 짧은&nbsp;DNA를&nbsp;만들어 놓으면 알아서 붙어진다.<br />&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;3-AGAGA-5<br />&nbsp;<br /><strong><font size="3">3. homopolymertailing<br /></font></strong>terminal transferase를 이용하는 방법으로 blunt end인 끝부분에 이 효소를 이용하여 붙인다.<br />a. vetor에는 terminal trasferase와 dCTP를 넣으면 끝부분부터 계속 C만 첨가된다.<br />b. insert에는 terminal trasferase와 dGTP를 넣어서 끝부분 부터 계속&nbsp; G만 첨가된다.<br /><br />두개를 같이 두면 수소결합을 해서 서로 붙을 수 있다. </p>