</font></strong><br />

<br />

</font>정제과정에서 단백질의 순도 검정에는 SDS - polyacrylamide gel 전기영동법 (SDS - PAGE) 이 가장 널리 이용되고 있다. SDS - PAGE에서는 작은 단백질일수록 빨리 이동하기 때문에 분자량 marker 와 비교함으로서, 비로소 분자량의 추정이 가능하다.<br />

경도가 높은 gel은, 즉 편목 구조가 적어지고, 작은 단백질을 분리하는데는 적당한 gel이 될 수 있다. 분자량에 관한 정보가 전혀 없을 경우에는, 10~20% gel을 사용하고 분자량 20000부터 200000 정도의 단백질을 1매의 gel에서 검출하는 것이 가능하다. Acrylamide의 농도 구배를 이용한 gel (gradient gel) 을 사용하는 방법도 있다.&nbsp;<br />

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<strong><br />

<strong>1) Mini gel용 전기 영동장치의 순서</strong><br />

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<strong>3) 시약의 조제<br />

</strong><br />

</font></font><br />

&nbsp;&nbsp;Acrylamide - 73g (최종농도 ; 29.2%)<br />

* 가호제는 N-N'-Methylenebisacrylamide 가 가장 일반적이지만 다른 것도 있음. 예를 들면 Piperazine diacrtlamide (Bio-Rad사) 는 gel의 강도가 높은 것이 있기 때문에 최근에 간혹 사용됨<br />

<br />

0.75M Tris-HCl (pH 8.8)</font></strong><br />

<br />

-&gt; DW를 첨가하여 약 800ml이 되게 하고, 실온에서 6N HCl로서 pH를 8.8 에 맞춘 후 1L 이 되게 mess up 한다. 냉장보존<br />

<br />

0.25M Tris-HCl (pH 6.8)</font></strong><br />

<br />

** Tris buffer는 온도에 의해서 pH가 변한다. SDS - PAGE는 실온에서 행하기 때문에 pH의 조정은 실온에서 행할 것. pH를 맞출 대 중화열에서 액온이 상승하면, 일단 pH를 맞춘 후 실온에서 방치하고 한 번 더 정확하게 pH를 맞춘 후 mess-up한다.<br />

<br />

10% SDS</font></strong><br />

<br />

-&gt; DW를 첨가하여 total 100ml 이 되게 한다. 실온 보존.<br />

<br />

25% APS</font></strong><br />

<br />

-&gt; 차광하여 냉장 보존에서 3~4 주간 사용 가능<br />

<br />

2X sample buffer</font></strong><br />

<br />

-&gt; DW를 가하여 total 50ml 이 되게 한다. 냉장 보존. (장기간 보존할 경우는 2-Mercaptoethanol을 넣어서 보존하는 것이 바람직하다.<br />

<br />

10X 영동 buffer</font></strong><br />

<br />

-&gt; DW를 가하여 total 1L이 되게 한다. 실온 보존.<br />

<br />

영동 buffer</font></strong><br />

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